一、血清学技术
(一)抗原抗体反应原理
1.特异性
2.亲和力(affinity)和亲合力(avidity)
3.可见性:可溶---沉淀/凝集
(二)沉淀反应(precipitation)
1.可溶性抗原与抗体反应形成沉淀物
2.单向免疫扩散(singleimmunodiffusion)
3.双向免疫扩散(doubleimmunodiffusion)
4.免疫电泳(immunoelectrophoresis)
(三)凝集反应(agglutination)
1.颗粒性抗原(细菌/红细胞)与抗体结合后形成凝集团块
2.直接凝集反应:ABO
3.间接凝集反应:用乳胶颗粒或红细胞包被抗原
(四)补体参与的反应
1.RBC+Ag,
2.Ab
3.C'---溶RBC
二、标记抗原或抗体的Ag-Ab反应
(一)免疫荧光法(immunofluorescence)
1.直接荧光法
2.间接荧光法
(二)酶免疫法(enzymeimmunoassay,EIA)
1.酶联免疫吸附试验(ELISA)
(1)双抗体夹心法
(2)间接法
(3)BAS-ELISA:生物素(biotin),亲和素(avidin)
2.酶联免疫斑点试验(enzyme-linkedimmunospotassay,ELISPOT)
3.免疫组化(immunohistochemistry)
(三)放射免疫(radioimmunoassay,RIA)
(四)化学发光法(chemiluminescenceimmunoassay,CLIA)
(五)免疫印迹法(immunoblotting),WesternBlottingSDS-PAGE(HIV)
(六)免疫PCR(immuno-PCR,IM-PCR)
三、淋巴细胞分离及检测技术
(一)淋巴细胞的分离与类型鉴定
1.分离:
(1)密度梯度离心法,尼龙毛,抗CD3法,SRBC
(2)流式细胞术(flowcytometry)
(3)磁珠分离法
2.鉴定:
(1)免疫荧光法,磁珠法,淘选法,
(2)流式细胞术(flowcytometry)
(3)磁珠分离法
(4)荧光激活细胞分选器(fluorescenceactivatedcellsorter,FACS)
(五)抗原肽-MHC分子四聚体技术(avitin*--biotin-MHC/peptide)
(二)T细胞功能测定
1.T细胞增殖试验
3H-Tdr掺入法(胸腺嘧啶核苷)
MTT法(3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑)
(细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶的底物,形成蓝色甲臢颗粒,可被盐酸异丙醇溶解)
2.细胞毒试验
51Cr释放法(Na251CrO4标记靶细胞,测释放)
乳酸脱氢酶释放法(细胞膜损伤,释放)
凋亡细胞检查法
3.皮肤试验
(三)B细胞功能测定
1.B细胞增殖试验
2.抗体形成细胞测定,溶血空斑试验(hemolyticplaqueassay)
(四)吞噬细胞功能测定
1.趋化功能测定
2.吞噬功能测定
四、细胞因子检测
(一)生物活性测定法
(二)免疫学检测法(ELISA)
(三)DNA聚合酶链反应(PCR法)
(四)皮肤试验
五、疾病的诊断
(一)感染性疾病
(二)免疫缺陷病
(三)自身免疫病
(四)超敏反应性疾病
(五)肿瘤