巴氏染色法

染色的目的是使细胞结构清晰，细胞透明度高，便于观察。染色归纳起来有两大类，即常规染色方法和特殊细胞化学染色方法。常用的染色方法有： 苏木精伊红染色法(同组织切片染色)、巴氏染色法、绍氏染色法、迈格吉染色等。

巴氏染色法

1．染液配制

(1)Harris苏木精的配制：(同组织染色)

(2)橙黄-G⁶：取橙黄-G⁶ O.5g，溶于95％酒精100ml中，加磷钨酸15mg。

(3)EA³⁶染液：

先配制原液(贮备液)：

①亮绿液：亮绿0.5g，溶于5ml蒸馏水中，再加纯酒精至100ml。

②俾士麦棕液：俾士麦棕0.5g，溶于5ml蒸馏水中，再加纯酒精至100ml。

③伊红Y液：伊红Y 0.5g，溶于5ml蒸馏水中，再加纯酒精至100ml。

临用前，将上述亮绿液45ml,伊红Y液45ml，俾士麦棕液10ml混合后，再加人磷钨酸0.2g，饱和碳酸锂水溶液1滴。

也可配制EA⁵⁰液：

3%亮绿水溶液10ml 纯甲醇250ml

20％伊红Y水溶液20ml；冰醋酸20ml

磷钨酸2g(水溶后加入)95％酒精700ml

2．染色步骤

• (1)将固定后的涂片入水、苏木精染核、盐酸酒精分化、返蓝同HE染色。
  (2)70％、80％、95％酒精逐级脱水各：1分钟。
  (3)橙黄-G⁶ 3-5分钟。
  (4)95％酒精I、Ⅱ缸洗各1分钟。
  (5)EA³⁶或EA⁵⁰ 5分钟。
  (6)95％酒精I、II缸洗各1分钟。
  (7)无水酒精I、Ⅱ缸洗各1分钟。
  (8)二甲苯I、Ⅱ缸透明各1。
  (9)中性树胶封固。

3．结果 巴氏染色法将胞核染为深蓝色；鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞胞质染绿色，表层不全角化细胞胞质染粉红色，完全角化细胞胞质呈桔黄*色；高分化鳞癌细胞可染成粉红色或桔黄*色；腺癌胞质呈灰蓝色；中性粒细胞和淋巴细胞、吞噬细胞胞质均为蓝色；红细胞染粉红色，粘液染成淡蓝色或粉红色。

4．巴氏染色特点 细胞透明度好，结构清晰，涂片色彩丰富而鲜艳，由于能显示鳞状上皮不同角化程度，常用于阴道涂片测定雌激素水平。宫颈涂片和痰涂片中分化差的鳞癌小角化细胞显示桔黄*色，在红色坏死背景中特别突出，不易漏诊。