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细胞固定

固定的目的是保持细胞形态尽量与生活时相似,防止细胞内的酶将蛋白质分解而自溶,沉淀或凝固细胞内物质,保持其与组织生活时相仿的成分,使细胞各部分易于着色。一般涂片如宫颈涂片、痰涂片,涂好后应立即固定。但如液体很稀薄,含蛋白质很少的尿液、胸腹水等,涂片后潮干固定,以免细胞漂落太多,影响制片质量。

(一)固定方法

1.浸入法 涂片直接浸入固定液内,因固定液充足,固定效果较好。但细胞易脱落而发生交叉污染,因此应该分瓶固定,固定液回收时应过滤。多数标本用此法固定,固定时间15-30分钟。

2.滴加法 将固定液直接滴加到涂片上盖满涂片膜,常用于需作瑞氏染色或迈格吉(MGG)染色的胸腹水细胞涂片。涂片一般是完全干燥后再固定。但因固定液量少,效果较差。

(二)常用固定液

1.95%酒精 最常用的细胞固定液,可加入l%量的冰醋酸(按95%酒精99份,冰醋酸1份的比例),以增强固定效果,并能对抗酒精固定的收缩作用。

2.乙醚酒精固定液 由95%酒精49.5ml,乙醚49.5ml,冰醋酸lml组成,固定效果较好。但乙醚易燃、易挥发,价格贵,临床使用较少。

3.Carnoy液 无水酒精:氯仿:冰醋酸:6:3:l。此固定液穿透力强,固定效果好。但价格贵,配制麻烦,一般只在核酸、糖原和粘蛋白等特殊染色中应用。

4.甲醇 固定效果好,核结构清晰,常用于瑞氏、MGG染色或免疫组化染色的自然干燥涂片预固定。一般滴加数滴铺满涂膜即可。

5.丙酮 穿透力强,对酶类固定效果好,常用于酶的组织化学染色固定。

(三)注意事项

1.根据染色要求和固定液特点,选择合适的固定液。如巴氏HE染色,选95%酒精;MGG染色选甲醇固定液;瑞氏染色以空气干燥固定为宜。

2.防止交叉污染,保持固定液浓度。一般酒精固定液浓度低于90%以下,不再用作固定液。

3.液体标本应在涂片后,让其在奎气中放置片刻,待涂膜周边稍干而中央尚未干时浸入固定液即潮干固定,如等全部细胞干燥后再固定,染色后细胞肿胀、核染色质结构模糊不清,此称为人为退变,常严重影响诊断。

4.标本固定时间不宜短于15分钟,最好在48小时内染色。穿透力强的固定液勿过夜染色。如果固定时间已到,应力争及时染色


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