细胞固定

固定的目的是保持细胞形态尽量与生活时相似，防止细胞内的酶将蛋白质分解而自溶，沉淀或凝固细胞内物质，保持其与组织生活时相仿的成分，使细胞各部分易于着色。一般涂片如宫颈涂片、痰涂片，涂好后应立即固定。但如液体很稀薄，含蛋白质很少的尿液、胸腹水等，涂片后潮干固定，以免细胞漂落太多，影响制片质量。

(一)固定方法

1．浸入法 涂片直接浸入固定液内，因固定液充足，固定效果较好。但细胞易脱落而发生交叉污染，因此应该分瓶固定，固定液回收时应过滤。多数标本用此法固定，固定时间15-30分钟。

2．滴加法 将固定液直接滴加到涂片上盖满涂片膜，常用于需作瑞氏染色或迈格吉(MGG)染色的胸腹水细胞涂片。涂片一般是完全干燥后再固定。但因固定液量少，效果较差。

(二)常用固定液

1.95％酒精 最常用的细胞固定液，可加入l％量的冰醋酸(按95％酒精99份，冰醋酸1份的比例)，以增强固定效果，并能对抗酒精固定的收缩作用。

2．乙醚酒精固定液 由95％酒精49.5ml，乙醚49.5ml，冰醋酸lml组成，固定效果较好。但乙醚易燃、易挥发，价格贵，临床使用较少。

3．Carnoy液 无水酒精：氯仿：冰醋酸：6:3:l。此固定液穿透力强，固定效果好。但价格贵，配制麻烦，一般只在核酸、糖原和粘蛋白等特殊染色中应用。

4．甲醇 固定效果好，核结构清晰，常用于瑞氏、MGG染色或免疫组化染色的自然干燥涂片预固定。一般滴加数滴铺满涂膜即可。

5．丙酮 穿透力强，对酶类固定效果好，常用于酶的组织化学染色固定。

(三)注意事项

1．根据染色要求和固定液特点,选择合适的固定液。如巴氏HE染色，选95％酒精；MGG染色选甲醇固定液；瑞氏染色以空气干燥固定为宜。

2．防止交叉污染，保持固定液浓度。一般酒精固定液浓度低于90%以下，不再用作固定液。

3．液体标本应在涂片后，让其在奎气中放置片刻，待涂膜周边稍干而中央尚未干时浸入固定液即潮干固定，如等全部细胞干燥后再固定，染色后细胞肿胀、核染色质结构模糊不清，此称为人为退变，常严重影响诊断。

4．标本固定时间不宜短于15分钟，最好在48小时内染色。穿透力强的固定液勿过夜染色。如果固定时间已到，应力争及时染色