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缺氧实验(一)

【目的要求】

1.学习复制动物缺氧病理模型的方法,掌握不同缺氧类型主要的发病原因和机制。

2.观察不同类型缺氧时呼吸、皮肤粘膜颜色、活动以及氧分压的改变。

3.了解机体功能、代谢特点与缺氧对机体影响的关系。

【实验原理】

不同的缺氧条件均可造成动物的缺氧状态,并表现出相应的机能代谢改变。但动物的不同年龄、不同机能状态,对缺氧的耐受能力也不尽相同。

【实验动物】

1.体重相近的小白鼠6只。

2.新生幼鼠1只。

【药品与器材】

钠石灰、玻璃珠、7%柠檬酸钠溶液、CO、2%亚硝酸钠、0.04%氰化物、蒸馏水、测氧仪、天平称、手术器械一套、试管、5ml注射器、青霉素小瓶、广口瓶、三角烧瓶。

【实验项目、步骤与观察指标】

1年龄因素对缺氧耐受性的影响

(1)取新生幼鼠1只,放入青霉素小瓶内(瓶口塞以少量棉花以免成年鼠伤害),然后将其与成年鼠一起放入广口瓶内,观察动物一般状况。

(2)密闭瓶塞,记录时间,观察两鼠状况。

(3)记录两鼠死亡时间。注意,当其中一只小鼠死亡后,不能揭开瓶盖;如另一鼠至各项实验结束时仍未死亡,实验也应中止。

2低张性缺氧实验

(1)用天平称重小鼠,取体重相近的2只小白鼠(体重相差<1g),分别投入钠石灰瓶(A)和玻璃珠瓶(B)内,在观察它们一般的活动状况后,同时密闭两只玻璃瓶,并开始计时。观察过程中必须经常注意瓶子的密闭性。

观察要点:两鼠在瓶内的活动度、呼吸、皮肤粘膜的颜色等变化,每3min记录一次,在其中一只小鼠死亡时,记录死亡时间,并做下步骤操作。

(2)立即用5ml注射器同时地从连接两只瓶子的乳胶管部位分别抽取约2ml气体,在注意固定注射针与注射器连接部位的情况下拔出注射针,并立即将注射针插入软木塞使抽取的气体与外界空气隔绝。经测氧仪测定A、B瓶内当时的氧分压。在持续保存两瓶密封的条件下继续观察另一未死亡小鼠的活动情况。在该鼠死亡时立即记录死亡时间,并同上述要求再次抽取A、B两瓶内的气体,测量氧分压。

比较A、B两只小鼠在不同密闭空间内存活时间的差别,以及与两鼠各自死亡时它们周围气中O2量消耗的差异。

(3)尸检:当两小鼠都死亡后,取其中1只小白鼠,打开胸腔,观察内脏颜色并与以下各项实验后小鼠尸检作比较。

开胸后,剪破心脏,用吸管滴入2滴7%柠檬酸钠溶液,迅速混匀,取出2滴,滴入盛有5ml蒸馏水的试管内,立即用软木塞盖紧,摇匀,观察试管内溶液的颜色,并与以下各项实验后制备的同种溶液作比较。

注:以下每个实验都有尸检这一步,以便比较不同原因所致缺氧时血液颜色的差异。所以,每次取血都应该尽量做到操作的“标准化”,如加入柠檬酸钠溶液的量和吸取抗凝血液的量(2滴,滴管口径粗细不同,2滴血液量多少可明显有差异)等。另外,放入血液的蒸馏水试管应立即用软木塞盖紧。)

3一氧化碳中毒

(1)取1只小白鼠观察其正常时的活动、腹式呼吸的频率等。

(2)将其放入烧瓶内,瓶内放入通入家用煤气的装置,通入煤气的玻璃管插入盛水的试管内,以试管内水中放出的气泡数调节通气量,气泡产生速度控制在10个/min左右,通气速度过快,可使小鼠所在三角量烧瓶内的CO浓度迅速增高,导致动物迅速死亡而影响血液颜色发生明显变化。记录通气时间和速度,观察实验小鼠一般状况的变化,直至死亡,再记录时间。

(3)观察记录死亡小白鼠其尾巴、耳朵、口唇颜色的改变。

(4)尸检(方法同实验第2项),并与其他实验动物比较。

4.亚硝酸钠中毒

(1)取1只小白鼠,称重,观察其一般状况。

(2)皮下注射2%亚硝酸钠,用量为0.35ml/10g体重,记录时间。

(3)观察实验小鼠一般状况的改变,直至死亡,记录时间。

(4)尸检(方法同实验第2项),并与其他实验动物比较。

5.氰化钾中毒

(1)取1只小白鼠,称重,观察其一般状况。

(2)腹腔注射0.04%氰化物(具体操作过程,可见P58),用量为0.2ml/10g体重,记录时间。

(3)观察实验小鼠一般状况的改变,直至死亡,记录时间。

(4)尸检(方法同实验第2项),并与其他实验动物比较。

【注意事项】

1.实验1、2所用广口瓶的容量应一致,瓶口须能密闭不漏气,以防因瓶内空间容积不同和漏气影响实验结果。

2.记录时间要准确,以便进行实验结果分析。

3.氢化物有剧毒,勿沾染皮肤、粘膜,特别是有破损处。

4.一氧化碳有毒,防止其过度溢出。

5.在血液颜色的对比观察时,试管应事先编号,以免搞错。另外,心脏取血的量要尽可能一致,否则造成溶液颜色对比性下降。

【思考题】

1.不同年龄动物对缺氧耐受性有何不同?分析其原因。

2.本实验中各种类型缺氧的原因和发病机制是什么?

3.各种缺氧时,小鼠口唇黏膜、耳、尾及血液颜色的改变为何不同?

4.如果发生煤气,对中毒者进行早期抢救处理的原则应注意什么?

5.亚硝酸钠中毒引起缺氧时,有哪些具有针对性的抢救治疗措施?

【实验结果记录】

年龄因素对缺氧耐受性的影响
  新生鼠 成年鼠
活动(行为)    

生命持续时间

   


低张性缺氧两小鼠的观察指标变化
实验条件 钠石灰瓶 玻璃珠瓶
体重    

呼吸变化

   
皮肤、粘膜颜色    
血色    
行为改变    
生命持续时间    

不同原因引起的低张性缺氧的耗氧量分析
实验条件 PiO2(mmHg)
钠石灰瓶 玻璃珠瓶

第1只鼠死亡时

   
第2只鼠死亡时    

不同类型缺氧时观察指标的结果比较
  呼吸变化 皮肤粘膜颜色 Hb颜色 生命持续时间
低张性缺氧        
CO中毒        
NaNO2中毒        
氰化物中毒        

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