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核酸染色

世上物质万种,名目繁多,但不管是动物还是生物,都含有核酸,它是生物在发育,繁殖,遗传和变异的主要物质,因而它成为人们的主要研究对象,在病理学的范畴中,主要是在形态学方面对核酸的显示。

核酸分为脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid, DNA)和核糖核酸(ribonucleic acid, RNA)两大类。在正常的情况下,其含量约占细胞干重的5-15%,约90%的DNA存在于细胞浆中,而少量的DNA(约10%)存在于细胞核中,RNA主要存在于细胞核中。当肿瘤生长活跃时,用于显示核中的物质就增多,染色增强。

一、DNA和RNA的简单结构

组成DNA分子的脱氧核糖酸主要有四种,即dAMP、dGMP、dCMP和dTMP,它有三个级别的结构即一级、二级和三级。

一级结构是由四种脱氧核糖核苷酸通过3,′-5′磷酸二酯键被此连接而成的线状或环状大分子,没有侧链。

二级结构是双螺旋结构,以一共同轴为中心,以一条5′-3′,另一条为3′-5′相反向,但互相平行的脱氧核糖苷酸链组成(即所称的麻花结构).

三级结构是指双螺旋链作进一步的扭曲构象。

组成RNA的四种碱基分别是:腺嘌呤,鸟嘌呤,胞嘧啶和胸腺嘧啶。

核酸受许多条件的制约,如温度、酸碱性试剂等。

最常导致核酸变化的是核酸的变性,当温度升高至50℃以上时,DNA的双螺旋结构即被破坏,氢键断裂,原来的两条结构链被彼此分开,涉及此种情况的是免疫组化染色方法时的前期处理,如抗原修复,微波辐射技术,水溶锅或者高压锅的抗原修复等,都涉及至双链的变化(见抗原修复法)。本文只谈核酸的形态学的显示。

二、Feulgen显示DNA法

结果:DNA呈鲜红色或紫红色。

注意事项:

三、核仁组成区和酸性粘多糖复合显示法(Combining method for Argyrophilic proteins of the nucleolar organizer regions and acid musin)

(1)试剂的配制:

①2%的甲酸和2%的明胶各一份,加入50%的硝酸银2份,测PH值约2-2.5。

②取0.5g阿申蓝(8GX)溶于3%的醋酸溶液中100ml,PH2.5。

(2)操作步骤:

结果:核仁组成区(AgNOR)显示大小不一的黑色颗粒;酸性粘多糖呈现;深浅不一的蓝绿色。

四、粘多糖和核仁组成区双染法(Double staining for cabohydrate and ANOR)

(1)试剂配制:

a)Schiff氏试剂见前。

b)胶性银液见前。

(2)操作方法:

结果:粘多糖呈深浅不一的红色,AgNOR呈现大小不一的黑色颗粒,炎性及良性肿瘤,AgNOR呈较均匀一致的黑色颗粒,无分叶或较少分叶。如为恶性肿瘤,AgNOR则呈现大小不一的黑色颗粒,分叶较多,有的多达3-5个分叶。背景呈现淡黄*色。

(3)注意事项:

①PAS-胶性银染色注意染色的顺序,如果先染胶性银,再染PAS,则不能顺利完成,因为当染完胶性银后,再染PAS时,由于切片需要用高碘酸氧化切片,使切片中含有1:2乙二醇基氧化而产生游离醛,但这种氧化的同时,也将已着染的氧化银颗粒给氧化掉,造成双染色的失败。

②切片在Schiff氏试剂中应根据其含量的多少来决定浸染的时间,含量多的浸染时间可以相对减少,含量少的浸染时间可以相对延长。

③胶性银液的浸染应根据室温来确定浸染时间,室温高浸染时间可相对减少,室温低应相对延长。

④慎防胶性银过染,导致着染的银颗粒分辨不清。

(4)临床和研究性应用

①用于良恶性肿瘤的鉴别诊断,良性肿瘤以及炎性组织,AgNOR的染色颗粒均匀一致,颗粒不粗,恶性肿瘤AgNOR的染色颗粒较粗,分叶较多,结构不均匀,分布杂乱。

②DNA量的增加可确定肿瘤细胞的生长跃。在HE染色中,许多肿瘤细胞核染色加深,这是由于DNA或RNA量的增加所致。


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