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糖类染色

该类物质以往人们习惯称之为碳水化合物,因为它含有碳、氢、氧三种元素所组成的化合物,和水分子中的氢和氧原子的数量一样,因此而得名,但随着年代的变迁,研究的深入,发现了有些物质的比例不象上述的碳氢比例那样相同,因此这类物质的正确叫法称为糖类。

糖类所包含的物质很多,分布很广泛,无处不在,分类也比较复杂。下面将根据各种染色法所显示的颜色,对它们进行显示,分类。

(I)多糖

这类物质包括糖元,纤维素,淀粉等。是以甙键结合成大分子的化合物,分子量大至几万到几百了等。

1、糖元,最常见于肝细胞内也可见于心肌和横纹肌。

(1)固定,历来都强调,糖元都溶于水,因此含水的固定液不能用,固定糖元用丙酮固定,效果非常好,值得注意的是,应用上述两种试剂固定糖元时,要防止“流水样”人工假象的出现,即糖元经固定液穿入组织时,将其推向细胞的一端后被固定,形成不溶性的物质,Bancroft应用福尔马林生理盐水固定时,获得满意的效果。

(2)显示法PAS(+)

2、纤维素,该法物质在机体发生病变时,(如白喉,痢疾等)所作出的反应。

(1)固定:历来对含有纤维素的组织的固定,不做特别的要求,但本人认为,如要作好纤维素的显示,也应与糖元的处理一样。

(2)显示法:PAS+PTAH,MSB

3、淀粉,(请看淀粉染色)

(II)中性粘多糖(中性黏液物)

该类物质存在于胃黏膜的表面上皮,十二指肠腺,结肠的杯状细胞,颌下腺,前列腺上皮等,含有氨基己糖和游离的己糖基,不含任何的游离酸基或硫酸酯,故称为中性。其反应基为乙二醇基或氨羟基。应用PAS显示时为阳性,AB阴性。

(III)酸性粘多糖(酸性黏液)

 A、硫酸化黏液物。

(1)强硫酸化结缔组织性黏液物 它存在于皮肤,角膜,软骨,心瓣膜,主动脉,肥大细胞等。PAS反应为阴性,AB为阳性。

(2)弱硫酸化上皮性黏液物 它存在于气管,支气管,结肠,颌下腺等。

临床应用:

①用于区别正常与病变组织,正常胃肠黏膜上皮,幽门腺,十二指肠等主要分泌中性黏液物,而小肠腺主要分泌中性黏液物而小肠及大肠的杯状细胞分泌酸性黏液物。如在这些部位出现相反的物质,则可确定其来源。

②用于Ewing氏瘤和骨的网织红细胞肉瘤的区别,两者在HE染色中形态极为相似,但前者含有糖元颗粒。PAS反应呈阳性,后者为阴性。

③用于观察组织在某些病变时糖元的分布。

④用于鉴别黏液肉瘤和脂肪肉瘤,前者,AB、PAS阳性,后者阴性。

B、非硫酸化黏液物

(1)含己糖醛酸的结缔组织黏液物,这类物质存在于脐带,滑膜,皮肤眼球玻璃体以及间皮细胞等处。

(2)含唾液酸的上皮性黏液物,这类物质存在于肠道,气管各支气管上皮的杯状细胞,唾液腺的黏液细胞,应用AB染色时,这两者都呈阳性,PAS反应时前者呈阴性或弱阳性,后者多呈阳性。

3、其他糖类:

糖蛋白,这类物质见于基底膜中和垂体的黏液细胞中,用PAS显示时呈阳性。

糖类物质的显示方法:

PAS显示法(Periodic Acid Schiff)、AB法、AB-PAS复合法(Alcian blue PAS)、胭脂卡红法(Carmine method)

染色反应的原理:

氧化:在PAS染色中,应用过碘酸把存在于组织中的双碳键形式存在的1:2乙二醇基(CHOH-CHOH)断裂开,使其转变为双醛(CHO-CHO)同时,其他的物质如氨基或烷基胺的衍生物也可以被转化为双醛。它们与试剂Schiff's结合后产生了一种络合物。

氧化时必须注意下列事项:

1、氧化时间不应太长或过短,以10min为限。

2、氧化环境以20℃为佳。

3、过碘酸的PH应为3.0-5.0。

一、PAS反应:(Periodic Acid Schiff Reaction)

结果:糖元、粘多糖呈鲜红色,细胞核灰至黑色,红细胞及基质呈橙黄*色。

二、不同PH AB显示酸性粘多糖染色法:(Alcian blue technique for acid mucins using varying PH of solution)

结果:酸性粘多糖呈绿蓝色,细胞核红色。

注意事项:

1、AB可配成许多不同的PH值的染液浸染各种类型的酸性粘多糖,比如有PH0.5、1.0 2.5 和3.2等

3、浸染时,可根据不同的含量来区分如强硫酸化粘多糖用较低的PH值,在1.0弱酸化粘多糖则用PH值2.5较好。

三、AB-PAS(Alcian blue-periodic acid sthiff)

结果:中性粘液物呈红色,酸性粘液物呈绿蓝色,复合物呈紫红色,细胞核呈灰蓝色,红色球和基质呈桔黄*色。

四、胭脂卡红法(Best,1906)

(一)试剂的配制:

1、Best胭脂红贮存液

取一滴烧瓶除氢氧化铵外,其余加在一起,于水烙锅中加热至沸腾冷却后过滤,再加入氢氧化铵,存放于磨口瓶中放于4℃冰箱中备用。

2、工作液的配制:

取贮存液10ml,氢氧化铵15ml,甲醇15ml,煮混匀后即可使用。

3、分化液:

取无水酒精20ml,甲醇10ml,蒸馏水25 ml,煮混匀后即可使用。

(二)操作方法:

结果:细胞核蓝色,粮顺手呈鲜红色或玫瑰红色。

(三)注意事项:

1、为了结果的准确性,切电必须做消化对照,具体做法有二。

(1)将切电置于10%的淀粉酶水溶液中,于37%孵育等 中消化1小时,然后馏水法,再与其它切电一同处理。最后切电显示糖元时为阴性。

(2)用一小晓朽,妆 唾液,然后加5-10倍的蒸馏不稀释。再进行消化切电30分钟,然后用蒸馏水洗切电,再同其它切电进行处理,最后显示糖原时为阴性。

2、应用PAS反应时,所用器血一定要干净,否则会产生污染或发生沉淀。

3、PAS反应时,切电不要用于触摸,否则由于手中的汗液会与试剂发生反应,造成 阳性。

临床及科研性应用

1、用于胃型胃癌和肠型胃癌的鉴别。胃粘膜表面上皮,十二指肠腺,颌下腺和前列腺上皮等。这些细胞所分泌的为中性粘液物,胃型胃癌的癌细胞分泌的属于中粘液物,PAS显示阴性。胃的肠型胃癌细胞分泌的粘膜液属于酸性粘液物。包括胃肠上皮化生的细胞所分泌的粘液都为酸性粘液物,AB显示阳性,PAS显示阴性。

2、用于粘液肉瘤和脂肪肉瘤的区别。在HE染色的物电,这两种肿瘤由于组织结构转复杂,大部分细胞呈空泡状,但只要用AB-PAS染色法,就能将其区分出来,前者其空泡内含有丰富的粘液,AB染色呈阳性,后者空泡AB染色呈阴性。

3、用于骨的Ewing肉瘤和骨的网识细胞肉瘤的区别,Ewing肉瘤细胞常含大量胞浆糖原[3P1963],PAS反应阳性,后者PAS反应阴性。

4、用于Paget病的鉴断,Paget病是一种外阴的恶性腺性肿瘤,可以将其看作来源于汗腺开口部位的汗腺癌,肿瘤细胞含有酸性粘液,AB等色阳性。

5、可用于透明细胞腺癌的鉴别诊断。镜下肿瘤细胞很大,部分细胞核突向腔内,呈“鞋钉”样结构,胞浆透明,其内含有糖元、粘液和脂肪,PAS阳性,即为疾病。

6、用于软骨母细胞瘤的诊断。疾病镜下细胞构成很丰富,变化多端,但基本的细胞是一种胚胎性的软骨母细胞,它们没有足够的分化 产生细胞间软骨样基质,细胞的形状常为多边形,胞浆内可见到糖原颗粒存在,电镜也证明胞浆糖元丰富。

7、用Kaposi肉瘤的辅助诊断。Kaposi肉瘤最典型的特征是梭形细胞形成含有红细胞的裂隙,病灶肉混有淋巴细胞,含铁血黄素细胞和其它 症细胞。增生细胞的胞浆内常可见大小不一的PAS阳性的玻璃样小体,有时也可见于细胞外。



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