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脂类染色

一、脂类概述

脂类物质在人体中占有相当大的部分,通常它们在人体内以两种形式存在,第一种为脂肪,主要为中性脂肪,储存的部位如皮下,大网膜,肌间肾周围组织等部位,另外一种为结构脂肪,如磷脂,胆固醇等它们与蛋白,糖类结合在一起存在于细胞内,构成细胞的组成成分。

1、单纯脂质:由脂肪酸各醇化合的酯,如中性脂肪,油及蜡等,苏丹染料可染为黑色或红色。

2、复合物质,脂肪酸的酯经水解后生成醇类,脂肪酸,磷酸和含氮的碱基等,复合脂质分为磷脂和糖脂。

①磷脂:卵磷脂,脑磷脂和神经鞘磷脂。苏丹黑染色为阳性,PAS反应为阴性。

②糖脂,PAS反应呈阳性。

③衍生脂质:指尚具有脂质性质的单纯脂质或复合脂的水产物,属于这类的有脂肪酸和固醇类。

脂肪酸:硫酸耐尔蓝阳性,PAS阴性。

胆固醇及其酯:Schultz试验阳性。

组织化学的脂类物质:

1、中性物质,如甘油三酯,胆固醇及其酯,类固醇和某些糖酯。

2、酸性脂质,脂肪酸,磷脂。

二、苏丹III IV联合法(combined SudanIII IV method for lipids)

1、脂类组织的固定及固定液

脂类组织的固定特别要注意的问题,就是不要选择含酒精的固定液,因为酒精可把脂类物质溶解,因此,用于脂类物质的首选固定液是甲醛,它可较好地保存脂类物质。

2、试剂的配制:苏丹III0.2g,70%酒精50ml;苏丹IV0.5g丙酮50ml。

3、操作步骤:

结果:脂类物质呈现橘红色或鲜红,核蓝色。

4、注意事项:

(1)苏丹III IV是一种偶氮类染料,不溶于水,配制时只能用酒精或丙酮当溶剂。

(2)进入染液前,切片要经过酒精洗,但酒精浓度不能太高,这样染液可以减少沉淀。

(3)最好使用漂浮染色法。这样可充分显示脂类物质。

三、显示脂类的油红法:

(1)操作步骤:

结果:脂类物质显示红色,细胞核显示蓝色。

(II)试剂的配制:

油红o(oil red o) 0.5g

异丙醇(isopropanot) 100ml

将异丙醇放入三角烧瓶,再加入油红O,于水浴中慢慢加热使之溶解,待至完全溶解后取出,冷却至室温后,过滤,装于棕色小磨沙口瓶保存,临用前取6ml加蒸馏水4ml,混合后静置10min后过滤,染色时间5-15min。

四、苏丹黑B显示脂类物质

(I)、操作方法:

结果:脂类物质:黑色,细胞核:红色。

(2)试剂的配制:

苏丹黑B(sudan blank B)0.5g

70%酒精 100ml

取一三角烧杯,装入酒精,再加入苏丹黑,在水浴中边加热边搅拌,直至沸腾达2-3min,取出待冷却后过滤,溶液保存于小磨沙瓶中。

五、漂浮染色法显示脂类物质:

(I)操作方法:

结果:依据选用的方法显示出各自的结果。

(III)注意事项:

六、Schultz法显示胆固醇与胆固醇酯

(I)操作方法:

结果:胆固醇和胆固醇酯呈绿色反应,当反应时间延长至30min时,反应物则转变为棕褐色。

(I)试剂的配制:

取一容器,盛入冰块或冰水,将冰醋酸装于小瓶后置入冰块中,再加入硫酸,混合后静置数分钟后取出即可。

(II)注意事项:

1、胆固醇和胆固醇酯显示好坏, 取决于切片氧化的程度,本法用的2.5%的铁明矾氧化2天或更长,如果在2天里的氧化效果不好,则可再延长氧化的时间。

2、皮尔斯主张2.5%的铁明矾用0.2M醋酸盐缓冲液来配制,且于 37℃处理7天。

3、配制醋酸和硫酸混合液,纯度要求较高,应用分析纯以上,如纯度较低,杂质含量较高,混合好可产生大量的气泡,影响观察。

临床应用:

1、鉴别脂滴和糖元。在HE切片中,如在胞浆内有大小不等的空泡出现,这主要有可能发生的是:脂滴被溶解,或糖元在常规处理时丧失掉了。用脂肪染色可以给予证明。

2、观察肝细胞,心,肾,骨骼肌细胞糖元的分布。如急性心缺血,心肌细胞由于缺氧面消耗了糖元。

3、鉴别横纹肌瘤和颗粒细胞母细胞瘤,前者阳性,后者阴性;而泡末细胞瘤和卵巢纤维瘤的区别,前者为阳性,后者为阴性。

4、与黏液物的区别。

5、Fabry病的诊断:Fabry病是一种α-连锁先天性糖鞘脂代谢障碍,细胞浆物质PAS和苏丹黑染色呈强阳性反应。

甘油明胶配法:

甘油50ml,蒸馏水50ml,明胶10g,酚0.5ml。把明胶溶于蒸馏水,搅拌片刻,放入37℃的温箱中过夜。第二天再加入甘油,加入酚做防腐,然后存放于4℃冰箱中,用时取出,用热水促其溶解即可使用。


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