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神经系统染色技术

一、苏木素VG法染中枢神经

二、神经细胞尼氏体染色

三、改良的Marsland, Glees方法染神经纤维

四、改良的Palmgren氏法染神经纤维

五、改良的Eager’s 法染变性轴索

六、改良的Loyez氏法染神经髓鞘

神经病理学是组织病理学的一个重要组成部分,神经病理学技术是一门较特殊的病理技术。神经组织的结构和功能较为复杂的特殊,用常规方法处理,常得不到想要的东西,因此,要想获取想要的东西,必须靠特殊的处理方法,才能将其充分地显示出来。神经系统方面可显示的物质较多,如尼氏小体、髓鞘、变性髓鞘、神经纤维和神经胶质细胞等等。这些都要靠特殊的银浸染技术,才能显示出来。下面将介绍几种显示上述物质的方法。

应用:神经系统染色应用于神经系统方面的各种疾病,如创伤、中毒、感染等引起神经系统方面的疾病,应作正常髓鞘和变性髓鞘的染色,以观察髓鞘的变化及脱失情况,如脱髓鞘假瘤与弥漫的纤维星型细胞瘤镜下有非典型性核分裂象和弥漫浸润的单核细胞,充分发育的巨噬细胞缺少细胞将会误诊为胶质瘤,应作胶质细胞和神经纤维染色。

一、苏木素VG法染中枢神经

结果:细胞:灰黑色,髓鞘:灰白色,胶原:红色,肌纤维:黄*色,神经细胞细胞浆:黄*色/琥珀色,胶质纤维:琥珀色

二、神经细胞尼氏体染色

正常的神经细胞都含有一定数量的尼氏化,它们主要分布于神经细胞的浆中,形状有大有小,如三角形,有的为椭圆形。这些物质能被大部分的蓝色染料所染色,这些染料如焦油坚牢紫(Cresyl fast violet)亚甲蓝(methylene blue)甲苯胺蓝(toluidine blue)硫董(thionin)等钭其染为蓝色。但是,当神经细胞受伤后,胞质内的尼氏体更可发生变化,严重的可消失。

焦油坚牢紫显示尼氏体

染液配制:

焦油坚牢紫 1g

蒸馏水 100ml

操作方法:

结果:神经细胞单位:紫-蓝色;细胞核:紫-蓝色;尼氏体:紫-深蓝色。

注意:1、应用酒精分化切片,要迅速,防止过度分化,将切片上的颜色全部脱掉。

三、改良的Marsland, Glees方法染神经纤维

(I)试剂的配制:

取无水乙醇 10ml,加入20%的硝酸银水溶液,搅拌均匀后逐滴加入浓氨水,先是形成沉淀,后再逐滴加入氨水,让早期形成的沉淀彻底溶解,然后再加入另外2-3滴氨水,即可使用。平时保存于4℃冰箱中。

(II)操作方法

结果:神经纤维:深棕色至黑色,背景淡棕色。

注意事项:

1、整个过程,应仔细操作,防止污染造成背景染色。

2、切片在9步骤后于镜下检查,如果浸染程度不够,颜色较浅,可以重复8、9步。

四、改良的Palmgren氏法染神经纤维

(I)试剂的配制:

a、酸性福尔马林

b、银溶液

c、还原液

用前须静置24小时

d、调色液

e、加强剂

50%乙醇 100ml

苯胺油(anilineoil) 2滴

f、固定液

5%硫代硫酸钠

(II)操作步骤

结果:神经纤维棕色至黑色。

五、改良的Eager’s 法染变性轴索

(I)试剂的配制

a、氨银液

b、还原液

(II)操作方法

结果:变性神经纤维,棕色到黑色。

正常的神经纤维,灰黄*色。

六、改良的Loyez氏法染神经髓鞘

(I)试剂的配制

a、碳酸锂苏木素液

b、铬酸氧化液

c、Loyez氏分化液

(II)操作方法

结果:髓鞘及红细胞显示深蓝色,轴索呈淡白色至淡黄*色,其它组织也呈现淡黄*色或灰黄*色。

(III)注意事项

1、在常规活检中,组织固定都是以福尔马林为主,没有特殊的固定液,如果作为科研标本,则可预先准备好特殊固定液固定组织,这样效果会更好。

2、原法采用Laanna氏铬化液即重铬酸钾9.5g,氯化锌4.5g,蒸馏水100ml,未氧化切片,改良法采用5%铬酸氧化液氧化切片,氧化力更强,效果更好。载片须用硅化载片,否则切片容易脱落。


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