卡氏肺孢子虫GMS染色

介绍

AIDS的重要机会性感染之一就是卡氏肺孢子虫感染。卡氏肺孢子虫不能通过常规培养方法检测,因此目前实验室主要开展的是组织学染色法。 国外多次证明GMS方法是实验室用于检测卡氏肺孢子虫最好的组织学染色方法),GMS主要对卡氏肺孢子虫的胞囊壁进行染色。

原理: 通过铬酸氧化真菌细胞壁成分而产生乙醛基团来还原银离子.

标本种类:

肺泡灌洗液,肺泡冲洗液,痰液(包括诱导或非诱导),经支气管镜活检物,胸腔纵隔淋巴结活检物, 经肺穿刺活检物.(痰液标本的阳性率最低)

质控: 使用真菌的阳性质控

试剂:

2% Chromic Acid：

Chromic trioxide 10.0gm

Distilled water 500.0ml

混合,溶液有效期6 个月

1% Sodium Metabisufite：

Sodium metabisulfite 5.0gm

Distilled water 500.0ml

混合,溶液有效期6 个月

5% hypo:

Sodium hypo 5.0gm

Distilled wanter 100.0ml

混合,溶液有效期3 个月

Methenamine Silver

Stock Solution( 储存溶液):

3% Methenime 100.0ml

(hexamethylenetetramine)

5% Silver nitrate 5.0ml

混合,保存在耐酸的棕色瓶内,4℃ 冰箱冷藏溶液有效期3 个月

Work Solution( 工作溶液):

Stock Silver Methen: 25.0ml

5% Borax 2.5ml

Distilled Water: 25.0ml

使用前混合,使用后丢弃

0.5% Glod Chloride:

Glod chloride 0.5gm

Distilled water 100.0ml

混匀,保存在耐酸的瓶中,冷藏. 有效期1 年

0.2% Light Green：

Light green SF yellow 0.2gm

Distill water 1,000.0ml

Glacial acetic acid 0.2ml

混匀,有效期6 个月.

安全:

操作时应穿戴手套, 护目镜,和实验室靴子. 注意避免接触和吸入以上试剂

操作步骤:

• 1.在chromic acid 中氧化1 小时(如果需要事先常规脱蜡至蒸馏水).
  2.用自来水清洗
  3. 1% Sodium metabisulfite 1分钟室温
  4.用蒸馏水清洗3 次
  5.预先加热工作溶液56℃水浴，然后摇动玻片直到玻片内容物颜色变暗黄*色或灰色
  6.蒸馏水冲洗2 次
  7. 0.5% Gold chloride 1分钟直到玻片内容物变褐色
  8.用蒸馏水冲洗
  9. 5% 硫代硫酸钠 3分钟
  10.蒸馏水冲洗
  11. 0.2% Light Green 1分钟
  12.蒸馏水冲洗
  13.在无水酒精中脱水干燥

结果

卡氏肺孢子虫-黑色, 涂片背景-绿色。

注意

1.如果chromic acid 变成褐色需要重新配置，2%的chromic acid 好于5% chromic acid，玻片山的内容物不容易脱落

2.如果菌体没有变成黑色检查以下试剂是否过期

A chromic acid

B sodium metabisulfite

C hypo

3.如果工作银溶液在玻片上变成云雾状或成镜状请使用新的溶液