基底膜染色

一、基底膜的结构

基底膜一般是由纤维的结缔组织，粘多糖和蛋白质所构成，电镜可分为三层，即中间层（电子密度较高的致密层）内层和外层（电子密度较低疏松层）。基底膜内主要含有IV形胶原蛋白，蛋白多糖和层粘连蛋白，这些物质的存在，给显示基底膜提供了物质基础。

二、显色的方法

(一)．六胺银法（Hexamine silver）Jones六胺银染色法的改良法

I．试剂的配制：

A液：3%乌铬托品（hexamine）

B液：5%硝酸银

C液：5%四硼酸钠（Sodium tetraborate）

II．工作液的配制：

取A液12.5ml，加入B液2.5ml，混合在一起，此时可出现乳白色，搅拌片剂，即可消失，再加入2.5ml的C液，再加入12.5ml的蒸馏水，即可使用。

操作方法：

• ①切片脱蜡至水。
  ②1%的过碘酸氧化切片10min。
  ③自来水洗，继入蒸馏水洗。
  ④入工作液于60℃60~90min，于50℃120~180min
  ⑤蒸馏水洗。
  ⑥用0.2%的氯化金水溶液调色1min。
  ⑦自来水洗，蒸馏水洗。
  ⑧5%硫代硫酸钠固定5min。
  ⑨自来水流1~2min.
  ⑩用1%淡绿复染30secd。
  ⑾脱水，透明，封固。

结果：基底膜呈出深黑色，背景呈现绿色。

(二)．AFOG法

试剂的配制：取苯胺蓝（aniline blue）0.5克溶于100ml的蒸馏水中，煮沸后冷却，再加入桔黄G1克，酸性品红1.5克，用HCC校正pH至1.9，即可使用。

• ①切片脱蜡至水
  ②AFOG液染色5min
  ③自来水洗，95%脱水多采染色
  ④脱水，透明，封固。

结果：基底膜，胶原纤维显示不同程度的蓝色，红白球及背景呈桔黄*色，管型蛋白呈鲜红色。

主要特点： 在一张切片上既可看到深黑色的基底膜和鲜红色的沉淀蛋白，又可看到蓝色的结缔组织，给予某些疾病的诊断和鉴别带来了方便。

三、临床应用：

• ①可以观察各种疾病的进展和损害程度。
  ②对膜性肾病可显示增厚的基底膜。
  ③可以观察某些肿瘤突破基底膜的情况。
  ④可以对某些疾病作出预后的判断。
  ⑤可用于卡氏肺囊虫肺炎的诊断。

四、注意事项

• ①如应用于基底膜的染色，应在切片脱蜡后用苦味酸进行媒染。
  ②切片浸染时间从染液达60℃算起。
  ③浸染应以基底膜染色合适为标准。
  ④浸染液一次性使用。
  ⑤所用的常备液应于4℃冰箱中存放。
  ⑥一切器皿须清洁液浸泡。
  ⑦在六胺银液中的浸染，可用微波加热法。在银液中的浸染时间为1分钟左右。