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冰冻切片

(一)冷冻切片的种类

冰冻切片的种类较多,有低温恒冷箱冰冻切片法,二氧化碳冰冻切片法,甲醇循环制冷冰冻切片法等。这些方法,随着时*代的变迁,科技的发展,许多年前被认为是非常重要的技术,现在也逐步被淘汰了。当然有些技术,如低温恒冷箱冰冻切片法,正在受到青睐。

(二)冷冻切片的目的

(1)在手术进行中,突然发现病人的病变与原诊断,原定手术方案不相符合,或者怀疑时,需要病理确定。

(2)了解淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞,或者转移的程度,以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者其它的治疗措施。

(3)对于已确定为恶性肿瘤的患者,则需要了解其手术范围是否足够,上下切缘是否有残存的肿瘤组织。

(4)在做剖腹探查时所发现的肿块或者异样的组织。

(5)显示组织中的脂肪和脂类物质,这常见于某些病例如脂肪瘤及肉瘤,某些科研组织等。

(6)某些酶的显示如ATP酶,琥珀酸脱氢酶等。

(7)神经病理学技术中的某些染色法如:Eager氏法,Marchi氏法,Cajal氏法,Hortega氏法和Holzer氏法等。

(8)对某些物质所进行的免疫荧光的研究。

(三)冷冻切片的制作方法

冰冻切片

(1)低温恒冷箱冷冻切片制作法

1.Shandon As 620 E型恒温箱冷冻切片机的主要性能。该机的箱面上有电子控制板,装有即时冷冻键和除霜键,启动即时冷冻键,机器马上进行工作状态,并可持续10mins。启动即时除霜键,可将工作间顶部后面的制冷栅上的霜除掉,并可持续15mins。有照明键一个,启动该键可照明工作间,有利工作及观察组织的冰冻状况。配有消毒键一个,当进行一周的工作或者一天的工作后,启动该键,可对工作间进行消毒。当每天工作完毕时,可启动密锁键,锁住工作间。除此之外,箱面的左边有四个按键,两个为快速自动进退键,两个为微小进退键,还有一个手动旋钮,调节修组织块时的进退。

冷冻箱内左边的冷冻台,温度可达-60℃左右,冷冻箱的中间为一台切片机,工作间的温度在0-30℃间可任意调节,并在箱面上的荧屏显示出来。

2.操作方法及步骤:

3.冰冻切片时的注意事项:

4.冰冻切片的快速染色法

冰冻切片附贴于载玻片后,立即放入恒冷箱中的固定液固定1分钟后即可染色。以往,为了防止切片脱落,当切片附贴于载玻片后,即用电吹风吹干后再固定。根据实验对比认为这种做法欠妥未经固定的切片,强热作用后,蛋白发生变性,核内含有的物质由于热的作用融合在一起,染色后镜下分辨不出核内的各种物质。冰冻切片附贴于载玻片后,立即放入恒冷箱中的固定液固定,这样可以使切片中细胞内各种物质都在没有任何变化的情况下被固定起来,经一年多来1000例冰冻切片的制作实践认为这样制作固定切片好,核染色质清晰,核仁明显,其他物质都完好保存。

冰冻切片染色

快速染色方法:

(1)切片固定30秒-1分钟。

(2)水洗。

(3)染苏木素3-5分钟。

(4)分化。

(5)于碱水中返蓝20秒。

(6)伊红染色10-20秒。

(7)脱水,透明,中性树胶封固。

冰冻组织1-2分钟,切片1分钟,固定1分钟,染色共五分钟。总共在10分钟内完成快速制片过程,结果与石蜡切片不相上下。
冰冻切片的方法还有很多种,如甲醇循环的半导体冰冻切片法,二氧化碳冰冻切片法,半导体冰冻切片法和氯乙烷冰冻切片法等,这些方法在目前来说已很少使用,因此在这里不作阐述。


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