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苏木素的种类及其配制法、伊红染液的配制法-常规石蜡切片制作

一、苏木素的种类及其配制法

苏木素是一种天然染料,它的获得是从苏木素的树心提炼而成的,市售略带浅褐色结晶,易溶于酒精和甘油,较难溶于水,需加热才能溶解。苏木素产生于墨西哥的坎佩切,国内使用的几乎都为进口。

苏木素作为单一的染色是不行的,它染色力弱,必须具备两个条件才能具有强的染色力。一是产生有效成分苏木红,二是加入媒染剂。苏木红的产生需经氧化才能获得,获得苏木红有两种方法,一是天然成熟,苏木素与其它试剂混合好后,暴露于阳光或亮处,在自然光的作用下,慢慢地氧化成熟,但时间较长,一般需四周左右。二是加入化学试剂促进成熟,如加入黄*色氧化汞或碘酸钠促使苏木素成熟。快速成熟的苏木素溶液有的可马上使用如Mayer氏苏木素,有的则需隔天使用。

苏木素种类较多,用法各异,有的用于常规染色,有的则用于特殊染色。

(1)明矾苏木素

1.Harris氏苏木素(1990)

该溶液为当前最广泛使用的染液,由于它染色时间短,效果好,很受使用者的欢迎。

配制时,先将苏木素溶于酒精(平时也可将苏木素以10%的浓度溶解好,贮存备用),取一2000ml的三角烧瓶,倾入钾明矾,加入蒸馏水,于电炉上加热,熔解钾明矾,完全熔解后,待温度至90℃左右时,加入预先溶解好的酒精苏木素,继续加热至沸腾,延续3-5min,此时溶液逐渐加深,变为紫红色,拔离电源,加入黄*色氧化汞,当充分氧化后,重新插上电源继续加热3-5min,此时溶液变深紫色,拔去电源,直接将三角烧瓶插入预先备好的冰水里,放于暗处,第二天过滤后加入冰醋酸,即可使用三个月,但据我们的实践及多年的经验认为,只要掌握好切片的“无水化”,该染液可反复使用达一年之久(天天使用)。

注意事项:

2.Mayer苏木素(1903)

该试剂有的单位用作常规切片的染色,用它染核不会过染,时间可在20min至30min,核染色质清晰可见,核呈灰黑色,可用作特殊染色核的对比染色试剂。如果先用天青石蓝为媒染剂,染色时间可在2-3分钟完成。

配制溶液时,先将蒸馏水稍加温,加入苏木素并不停搅拌直至完全溶解,继而加入硫酸铝钾,令其充分溶解后,加入柠檬酸和水合氯醛,继续搅拌均匀,全部溶解后再加入碘酸钠,搅拌均匀,此时溶液的颜色变为深棕色,过滤后即可使用。

3.Ehrlich氏苏木素(1886)

将苏木素溶于无水酒精里,硫酸铝钾溶于蒸馏水中,然后所有的试剂都加在一起,充分搅拌均匀后,放于窗台上阳光充足的地,让其慢慢氧化成熟,大约需四个星期,才可使用。该液 量种很好的细胞核染色液,用它染后,细胞核染色清晰,不易过染。对于用酸脱钙组织细胞核的染色,该试剂优于其它各种苏木素。这种自然氧化成熟的苏木素,可长期使用,不会变质。但染色时间较长,需要20分钟以上。

如需急用而苏木素又未成熟时,该液可加入20-30mg的碘酸钠,以促使其迅速氧化成熟,但这试剂配成后,就不是原来的苏木素,不能长期使用,但起码可用半年左右。

4.Carazzi氏苏木素(1911)

将苏木素溶于甘油,硫酸铝钾溶于300ml的蒸馏水中搅拌至完全溶解后,混合两液,将碘化钾溶于剩余的100ml蒸馏水中,加温到溶解后,混合于上述的混合液中,搅拌均匀,过滤后即可使用,染色时间10min左右,配成后的液体可保存半年左右。

5.Cole氏苏木素(1943)

将苏木素溶于加温的蒸馏水中,然后加入碘酒溶液,继而加入饱和硫酸铝钾溶液,混和均匀后加热,直至沸腾,将瓶子插入预备的冰水中,如同配制Hari氏苏木素一样,第二天过滤,即可使用,染色时间为20min以上。

(2)铁苏木素

1.Weigert氏铁苏木素

A液:      苏木素        1g

        无水酒精      100ml

将苏木素溶于酒精,让其慢慢氧化成熟,约四周以后,便可以使用,或者用成熟的10%的苏木素酒精配制,即时可用。

B液:      29%三氯化铁水溶液   4ml

         蒸馏水       95ml

         盐酸         1ml

临用时,取A液和B液等份混合,即可使用,在4小时内使用完毕,如果超时,这种试剂便过分氧化而失效。因此,每次使用,需要多少配制多少,采取一次性用完,以免造成浪费。该染液具有抗弱酸的能力,因此,常用于某些特殊染色核的染色,染色时间为20-30分钟。

2.Heidenhain氏铁苏木素(1896)

A液:      苏木素      0.5g

         无水酒精     10ml

         蒸馏水      90ml

将苏木素溶于无水酒精,然后再加入蒸馏水,放置四周后便可成熟。

B液:      硫酸铁铵     5g

        蒸馏水      100ml

这种铁苏木素可以显示多种物质如:横纹肌、髓鞘、线粒体、细胞核等,可被染为深灰色至黑色。

(3)钨苏木素

磷钨酸苏木素(PTAH)

苏木素    0.5g

磷钨酸    5g

蒸馏水    500ml

取300ml蒸馏水来溶解苏木素,其余的蒸馏水溶解磷钨酸,然后两者混合在一起,搅拌均匀后放于亮处,约四周左右才可成熟使用。

该试剂可以显示多种物质,如:横纹肌、神经胶质细胞、纤维、纤维素、髓鞘、胶厚,和细胞浆等,染色时间24小时以上。这种试剂配成后,可连续使用达数年时间。

(4)钼苏木素

磷钼酸苏木素(Thomas, 1941)

将B液过滤,取滤液50ml加到A液中去,充分混合后,可见该试剂为深紫色,放置24小时后,才可使用。染色时间2分钟。它可显示的物质为:胶原及粗的网状纤维;亲银细胞;核、Daneth氏细胞等。

(5)铅苏木素(Solcia等,1969)

硝酸铅苏木素

A液: 1.5克苏木素溶于10ml 95%酒精中,取 1.5ml

    硝酸铅贮存液            10ml

    蒸馏水               10ml

混合上述液体,搅拌均匀后,静置30分钟后过滤。

B液: 5%硝酸铅水溶液            50ml

    饱和醋酸铵水溶液          50ml

混合两液,过滤,再加入甲醛2ml。

将A和B液混合,反复搅拌后放置30分钟,过滤后可使用。染色时间37℃ 2-3小时,45℃ 1-2小时。

该试剂可将内分泌颗粒和APUD细胞颗粒显示出来,同时也可把肌肉和神经等显示出来。

二、伊红染液的配制

在普通染色法中,有了细胞核的染色还不够,还不能完整地显示整个细胞来,只有同时将细胞浆显示出来,细胞才完整。因此伊红的染色也与苏木素同等重要,就如同人的左右臂,缺一不可。

配制伊红,有许多种方法,根据各单位的情况,使用不同种类的伊红。

市售的伊红有两种:一是水溶性伊红,二是醇溶性伊红,在我们的实践中,水溶性伊红用低浓度的酒精来配制,只要配制得当,其效果非常好。

伊红       1g

70-75%酒精    100ml

先将伊红用蒸馏水(少许)调成浆糊状,再加入酒精,边加边搅拌,直到彻底溶解,此时试剂有些混浊,取少许冰醋酸,加入到试剂中去,试剂逐渐转变为清亮,呈鲜红色,染出切片,效果很好。


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