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烘烤切片-常规石蜡切片制作

烤片

切片的烘烤看似简单,只在烘烤箱或干燥箱一放,让其烘烤就行了,但从某种意义上讲,它也是一个关键,如果切片烘烤不好,到染色的时候,便会使切片脱离载玻片(掉片),使整个过程毁于一旦,因此,认真烤好切片是制好切片的前提。怎样才能使切片烘烤得好呢?我们的做法如下:当切片裱于载玻片后,于烘烤箱边竖立起来,控干水份,然后平放于烘烤箱的烤板上烘烤,温度可调至70℃。当最后一个蜡块切完后,前面的切片也烤得差不多了。

关于切片的烘烤,尤其是需做免疫组化切片的烘烤,要特别的注意对抗原的保存,使它们能在合适的烘烤切片时间内既不受到破坏,又能尽量地显示出现,经多组多次的实验认为,温度和时间是极为重要的。温度过高能使蛋白变性,抗原失活至丧失,时间过长,也会致使其失活和丧失。最初有人主张切片在60℃以下烘烤30-60min,然后进行染色,依此法进行实验,结果切片脱片率高,切片松动的占100%,由于切片附贴不牢,染色时不敢用PBS充分冲洗,造成背影染色加深,鉴别特别困难。又由于脱片严重,重染次数增多,延误了诊断,也造成年人力物力的浪费。究竟什么样的温度及时间才能做到既使切片附贴牢固,又不会对抗原造成影响的呢?经实验证明:切片在60℃恒温箱中连续烘烤3-5小时最为合适。这种时间和温度烘烤出来的切片,可以用于抗原修复,PBS的冲洗,可满足做免疫组化的一切需要。切片在上述的烘烤时间和温度是否对抗原有影响呢?笔者认为,不必为此而担心。因为活检组织块浸蜡时,浸蜡箱的温度都调在65℃左右,组织块在这样的温度中起码要浸泡2小时以上,才能达到浸蜡较为彻底的要求。组织中的抗原,经过65℃的考验,保留下来的,基本上都已具有耐热性,因此,几小时的烘烤,不会对抗原有影响,实验证明,上述的理论完全正确。


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